无菌播种

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（一）实践目的

 学习利用植物种子的胚轴[是种子植物胚的组成部分之一，为子叶着生点与胚根之间的轴体。]进行愈伤[愈伤（callus）是指植物体的局部受到创伤**后，在适宜环境条件下，在伤口表面新生的组织。]组织培养[植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。]的方法，主要是种子的无菌接种技术。

 （二）实践地点和时间

 植物组培室、建议4学时

 （三）实践用具与材料

 超净工作台、手术剪、*状镊、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌[采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。]锅、电子天平、盛物篮、植物种子、70%酒精、0.1%升汞、zt、2,4—d、大量元素、微量元素[微量元素在人体中存在量极少，通常指低于人体体重0.01%的矿物质。]、琼脂、蔗糖

 （四）实践内容

 1、培养基[培养基（Medium）是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。]制备

 配制ms培养基：用大量元素、微量元素、维生素、铁盐配制，不加植物生长物质。

 每升培养基加入30/l蔗糖、8g琼脂，将ph值调节到5.8。

 2、高压灭菌

 培养基入高压锅[高压锅又叫压力锅，压力煲，是一种厨房的锅具。]1.11-1.12pa下稳压灭菌23分钟，制备无菌水，同样高压灭菌30分钟，灭菌时将接种器械和纱布等放入高压锅一同灭菌。

 3、无菌苗的制备

 选择健康饱满的种子，流水下清洗干净，置超净工作台上。无菌水冲洗2-3次后，视材料情况，（较老较硬的种子）可剥离种皮后0.1%升汞灭菌，也可以（较嫩较软的种子）先灭菌后再用器械无菌剥离种皮。

 4、无菌播种

 剥离种皮的种子用无菌水2-3次冲洗后，接种到已制备的ms培养基中，每瓶培养基接种一粒。做好标记，置于培养室光下培养，以后一周随时观察生长状况。

 5、清洁整理

 清洁整理工作台和组培室，并将器械等工具清洗整理好以备下次实训使用。

 （五）作业

 写出下胚轴愈伤组织培养实践报告，并写明下胚轴愈伤组织培养的操作要领

 （六）评分标准

 无菌播种操作正确，成活率高，污染率小。

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